บัฟเฟอร์อิเล็กโทรโฟรีซิสแบบรวดเร็ว: ทําให้เจลเป็นจุดตรวจสอบ ไม่ใช่แค่ขั้นตอนรอ

อิเล็กโทรโฟรีซิสด้วยเจลอากาโรสไม่ใช่จุดจบของการทดลอง

บ่อยครั้งมันอยู่ตรงกลาง

คุณทําการตรวจ PCR ตรวจเจล และตรวจสอบว่าผลิตภัณฑ์ PCR ควรถูกทําให้บริสุทธิ์หรือไม่ คุณย่อยพลาสมิด ดูแถบ แล้วตัดสินใจว่าจะดําเนินการต่อหรือไม่ คุณเตรียมตัวอย่างสําหรับการถอดรหัส ทําเจล QC อีกครั้ง และตัดสินใจว่าจะดําเนินการอย่างไรต่อไป

นี่จึงเป็นเหตุผลว่าทําไมการนั่งรอเพื่อการอิเล็กโทรโฟรีซิสจึงดูเหมือนจะนานมาก ไม่มีอะไรจะไหลลงไปจนกว่าคุณจะเห็นแถบ แม้ว่าเจลจะใช้เวลาแค่ครึ่งชั่วโมงเท่านั้น

ข้อได้เปรียบหลักของบัฟเฟอร์อิเล็กโทรโฟรีซิสแบบรวดเร็ว คือการย่นระยะเวลาการตัดสินใจนั้น ไม่ใช่แค่เร่งการเคลื่อนที่ของดีเอ็นเอเท่านั้น

Longlight's บัฟเฟอร์ทํางานเร็วสุด 50 เท่า เป็นบัฟเฟอร์อิเล็กโทรโฟรีซิสอากาโรสที่มีความเข้มข้นต่ํา ซึ่งช่วยให้การแยกดีเอ็นเอได้รวดเร็ว โดยทั่วไปสามารถแยกส่วนได้ภายใน 5-10 นาที แทนที่จะเป็น 30 นาทีภายใต้เงื่อนไขที่แนะนํา

ถ้าคุณไม่แน่ใจเกี่ยวกับสายรัด เจลแค่ห้านาทีก็ไม่คุ้ม

ความเร็วเพียงอย่างเดียวไม่ใช่ผลลัพธ์ที่ต้องการ

ถ้าเจลไม่ออกมา ก็จะเป็นเจลซ้ํา 5 นาที และไม่ใช่การทดลอง 5 นาทีอีกต่อไป

แม้แต่ในแอปพลิเคชันชีววิทยาโมเลกุลทั่วไป ก็ต้องแยกแยะแถบความถี่เพื่อทําการตัดสินใจถัดไป: ผลิตภัณฑ์ที่คาดหวังถูกสร้างขึ้นในรูปแบบ PCR หรือไม่? มีแผ่นแทรกอยู่ไหม? พวกมันเหมาะสําหรับการกู้คืนดีเอ็นเอหรือไม่? มีอะไรอีกไหมที่คุณต้องทํากับตัวอย่างนี้?

บัฟเฟอร์ที่ทํางานเร็วนี้สามารถรองรับความเข้มข้นของอะกาโรสที่ 0.8%, 1% และ 2% และสามารถแยกแถบกรดนิวคลีอิกได้อย่างชัดเจนในเจลเหล่านี้ ตามข้อมูลของ Longlight

ดังนั้น เป้าหมายที่ถูกต้องจึงไม่ใช่ความเร็วในการย้ายสูงสุด

มันคือจํานวนขั้นต่ําที่เพียงพอสําหรับการตัดสินใจ

หน้าต่างแรงดันไฟฟ้าที่มีประโยชน์จะถูกเปลี่ยนแปลงโดยการเปลี่ยนแปลงความแรงไอออนิกต่ํา

เห็นได้ชัดว่ามีขีดจํากัดในการเพิ่มแรงดันไฟฟ้าเพื่อให้เจลแบบดั้งเดิมเร็วขึ้น: ความร้อน

ความสามารถในการคาดการณ์ของการเคลื่อนที่และรูปร่างแถบอาจลดลงเมื่อกระแสไฟฟ้าและโหลดความร้อนเพิ่มขึ้น ในทางกลับกัน บัฟเฟอร์แบบรันเร็วจะแก้ปัญหานี้จากมุมมองที่แตกต่างโดยการลดความเข้มของไอออน ซึ่งช่วยลดการสร้างความร้อนและอนุญาตให้ใช้สนามไฟฟ้าที่สูงขึ้นในระหว่างการแยก ตามข้อมูลของ Longlight ความยาวเจลของบัฟเฟอร์ทํางาน 1X อยู่ที่ประมาณ 25–30 V/cm ขึ้นอยู่กับรูปทรงของถังอิเล็กโทรโฟรีซิสและอุณหภูมิของสภาพแวดล้อม

ความแตกต่างนี้สําคัญ

"อิเล็กโทรโฟรีซิสแบบเร็ว" ไม่ได้หมายถึงการใช้แรงดันไฟฟ้าสูงขึ้นจนกว่าจะมีบางอย่างผิดปกติ

ควรหมายถึงการใช้บัฟเฟอร์และหน้าต่างการทํางานที่ออกแบบมาให้ทํางานร่วมกัน

บัฟเฟอร์ 1X ถือเป็นส่วนหนึ่งของวิธีการนี้

สต็อกเข้มข้นดูเหมือนจะเป็นแนวคิดง่าย ๆ คือเจือจางแล้วไหลออกมา

ที่นี่ ทางลัดเล็ก ๆ ในห้องปฏิบัติการก็อาจทําให้เกิดความหลากหลายที่ไม่จําเป็นได้เช่นกัน

บัฟเฟอร์แบบรวดเร็วที่ Longlight จัดหามาเป็นสารเข้มข้น 50X ซึ่งเจือจางในน้ํากลั่น 1:50 เพื่อให้ได้สารละลายที่ใช้งานได้ 1X บริษัทไม่แนะนําให้มีเงื่อนไขบัฟเฟอร์ที่แตกต่างกันระหว่างเจลกับถัง และแนะนําให้ใช้สารละลาย 1X ชุดเดียวกันสําหรับการหล่อเจลและอิเล็กโตรโฟรีซิส การเจือจางต่ํากว่า 1X ก็ไม่แนะนําเช่นกัน เพราะอาจเกิดการเคลื่อนที่ผิดปกติได้

เมื่อขั้นตอนเจลรวดเร็วสําเร็จแล้ว ให้เพิ่มเข้าไปใน SOP

หลีกเลี่ยงการปล่อยให้เป็นสิ่งที่ "ทุกคนในห้องปฏิบัติการ" "รู้คร่าว ๆ"

อย่าคัดลอกแรงดันไฟฟ้าจากถังของคนอื่น!

หากไม่มีความยาวเจล ค่าแรงดันไฟฟ้าจะไม่สมบูรณ์

ควรคิดถึงการวิ่งในแง่ของความเข้มสนาม เพราะอัตราส่วนระหว่างระยะทางกับเวลาไม่เหมือนกันสําหรับห้องอิเล็กโทรโฟรีซิสขนาดกะทัดรัดกับเจลที่ยาวกว่า

นั่นคือเหตุผลที่ Longlight กําหนดช่วงการทํางานต่อเซนติเมตรของเจล นอกจากนี้ยังสามารถรองรับถาดหลายประเภท เช่น เจลสั้น ยาว กว้าง และขนาดใหญ่ ซึ่งเป็นเหตุผลว่าทําไมแรงดันไฟฟ้าที่จดจําไว้หนึ่งไม่ควรถูกส่งต่อจากชุดหนึ่งไปยังอีกชุดหนึ่งได้ง่าย ๆ ด้วย HE-50 ระบบเจลแนวนอน.

เริ่มต้นด้วย "ความแรงสนาม" ที่ได้รับการยืนยันและสังเกต "เจลจริง"

อุณหภูมิ การออกแบบถัง และขีดจํากัดพลังงานยังคงเป็นการทดลอง

อิเล็กโทรโฟรีซิสอย่างรวดเร็วเมื่อการตัดสินใจง่าย

เจลทุกชนิดไม่ได้มีหน้าที่เหมือนกัน

บางครั้งนักวิจัยต้องการการแยกวิเคราะห์อย่างละเอียด อีกวิธีหนึ่งคือเพื่อดูว่าผลิตภัณฑ์ PCR ได้ขนาดใกล้เคียงกับขนาดที่ถูกต้องหรือไม่

กรณีที่สองคือแนวคิดของการอิเล็กโทรโฟรีซิสแบบรวดเร็วที่มีประโยชน์อย่างยิ่ง

ปัญหาเล็ก ๆ น้อย ๆ หลายอย่างอาจเกิดขึ้นตลอดวันทํางาน เช่น การยืนยัน PCR, การคัดกรองโคลน, การตรวจข้อจํากัด และการตรวจสอบคุณภาพดีเอ็นเอขั้นกลาง จุดตรวจเหล่านั้นอาจสั้นลงหากทําเช่นนั้น ซึ่งหมายความว่านักวิจัยสามารถตัดสินใจทดลองหลายอย่างในช่วงบ่ายวันหนึ่ง แทนที่จะต้องรอการทดลองซ้ํา ๆ

การตรวจสอบตามปกติเหล่านี้สามารถทําให้ง่ายขึ้นอีกโดยใช้เครื่องหมาย DNA พร้อมใช้งาน เนื่องจากเครื่องหมายของ Longlight มาพร้อมกับบัฟเฟอร์โหลดและออกแบบมาเพื่อใช้โดยตรงในอิเล็กโทรโฟรีซิสแบบอากาโรส

แนวคิดไม่ใช่การทําให้การทดลองอิเล็กโทรโฟรีซิสทุกแบบเป็นมาตรฐานเดียวกัน

สิ่งสําคัญคือต้องเข้าใจว่าเจลชนิดใดถูกออกแบบมาเพื่อตอบคําถามที่รวดเร็วจริง ๆ

กระบวนการประหยัดเวลาจะไม่ดําเนินต่อจนกว่าขั้นตอนถัดไปจะพร้อม

ลองนึกภาพว่าทําอิเล็กโทรโฟรีซิสเป็นเวลา 8 นาที แล้วต้องเตรียมทุกอย่างในขั้นตอนถัดไปอีก 20 นาที

บัฟเฟอร์นั้นรวดเร็วมาก กระบวนการทํางานไม่ใช่แบบนั้น

เมื่อพิจารณาขั้นตอนรอบข้าง การอิเล็กโทรโฟรีซิสแบบรวดเร็วเป็นวิธีที่ดีที่สุด ตามข้อมูลของ Longlight บัฟเฟอร์ Super Fast Running Buffer จะไม่รบกวนการทํางานในขั้นตอนถัดไป การสกัดและการเชื่อมต่อเจลดีเอ็นเอสามารถทําได้กับดีเอ็นเอที่เก็บได้จากบัฟเฟอร์ลองไลท์

หากเวลาการเตรียมเจลเป็นข้อจํากัดสําหรับห้องปฏิบัติการ ทางเลือกอื่นคือการใช้ เจลสําเร็จรูปอะกาโรสซึ่งเตรียมพร้อมสําหรับการบรรจุแล้วและไม่อยู่ภายใต้เวลาการเตรียมเจลแบบดั้งเดิม

นี่คือจุดที่การประหยัดเวลาเล็กน้อยหลายอย่างกลายเป็นตัวช่วยประหยัดเวลาจริงในงานบนโต๊ะทดลอง

การถ่ายภาพเป็นขั้นตอนถัดไปที่ช่วยชะลอการติดเจลr

เมื่อขั้นตอนหนึ่งในกระบวนการห้องปฏิบัติการถูกเร่งให้เร็วขึ้น สิ่งที่คุ้นเคยก็เกิดขึ้น

ทันใดนั้น คุณก็รู้ทันทีว่าครั้งต่อไปยาวเท่าไหร่

เมื่อการแยกเสร็จสิ้นภายในไม่กี่นาที เวลาที่ใช้ในการถอดเจล ตั้งแสงสว่าง ปรับการเปิดรับแสง ระบุบันได และบันทึกภาพ อาจเป็นสัดส่วนที่มากกว่าของเวลารวมทั้งหมด

ด้วยการประมวลผลภาพในตัวและการบันทึกเครื่องหมายอัตโนมัติ Longlight ระบบถ่ายภาพเจล GI-200 เหมาะสําหรับห้องปฏิบัติการที่ต้องการประยุกต์ใช้งานเกินกว่าระยะเวลาการวิ่งอิเล็กโทรโฟรีซิสเท่านั้น

ดังนั้นจึงสําคัญที่บัฟเฟอร์แบบรวดเร็วจะไม่ถูกประเมินแยกกัน

วัดระยะเวลาของเวิร์กโฟลว์ ตั้งแต่การแนะนําตัวอย่างจนถึงเวลาที่คุณสามารถตัดสินใจเกี่ยวกับการทดลองครั้งต่อไปได้

นําเสนอหลักฐานว่าการใช้น้ําซ้ําปลอดภัย แสดงหลักฐานว่าการใช้น้ําซ้ําปลอดภัย

Longlight ระบุว่าบัฟเฟอร์มีบัฟเฟอร์เพียงพอที่จะใช้ได้หลายครั้ง แต่ไม่สามารถใช้ได้ไม่จํากัดจํานวนครั้ง

สภาพแวดล้อมการทํางานอาจเปลี่ยนแปลงได้ด้วยอิเล็กโทรโฟรีซิสต่อเนื่อง สภาพห้องที่อบอุ่น และการใช้งานสะสม ดังนั้น ตามคําแนะนําของผู้ผลิต ควรเปลี่ยนบัฟเฟอร์วิ่งเป็นระยะเพื่อให้เกิดความซ้ําได้

ตอนนี้เป็นเวลาสําหรับกฎแลปง่าย ๆ

กําหนดเวลาที่ต้องเปลี่ยนบัฟเฟอร์ แทนที่จะรอจนเจลที่ดูแปลกๆ เตือนว่าถึงเวลาต้องเปลี่ยน

การตรวจสอบรอบสุดท้าย

เมื่อพิจารณาใช้บัฟเฟอร์อิเล็กโทรโฟรีซิสแบบรวดเร็วในห้องปฏิบัติการปกติ ควรตรวจสอบความถูกต้องของบัฟเฟอร์ด้วยตัวอย่างที่ห้องปฏิบัติการใช้ในการประมวลผล

คิดสูตร 1X ที่เหมาะสม การขว้างและการทํางานควรทําในบัฟเฟอร์เดียวกัน เลือกความแรงสนามไฟฟ้าตามความยาวของเจลและสภาพถัง ดูอุณหภูมิ ตรวจสอบให้แน่ใจว่าแถบที่ผลิตออกมาเพียงพอสําหรับการตัดสินใจ

จากนั้นวัดสิ่งที่ไม่ใช่เวลาอิเล็กโทรโฟรีซิส ซึ่งเป็นสิ่งที่มีประโยชน์:

โหลดตัวอย่างเพื่อกําหนดว่าจะทําอะไรต่อไป?

นี่คือจุดที่ Rapid Electrophoresis มีบทบาทในห้องปฏิบัติการ

คำถามที่ถามบ่อย

คําถามที่ 1. บัฟเฟอร์อิเล็กโทรโฟรีซิสแบบรวดเร็วหมายถึงอะไร? คําว่า 'บัฟเฟอร์อิเล็กโทรโฟรีซิสแบบรวดเร็ว' คืออะไร?

บัฟเฟอร์แบบวิ่งที่ออกแบบมาเพื่อให้แยกกรดนิวคลีอิกในเจลอากาโรสได้รวดเร็วยิ่งขึ้น รุ่นของ Longlight ถูกออกแบบมาด้วยความแข็งแรงของไอออนิกต่ํา ช่วยให้ได้ความเข้มสนามมากขึ้นและลดการสร้างความร้อน

คําถามที่ 2 การอิเล็กโทรโฟรีซิสแบบรวดเร็วสามารถเกิดขึ้นได้เร็วแค่ไหน? แต่ rapid electrophoresis จะเร็วแค่ไหน?

Longlight โดยทั่วไปจะสามารถแยกตัวได้ประมาณ 5 - 10 นาทีภายใต้เงื่อนไขที่แนะนํา เทียบกับการแยกแบบปกติที่ใช้เวลาประมาณ 30 นาที ประสิทธิภาพจริงจะขึ้นอยู่กับความยาวเจล การออกแบบถัง และสภาพการใช้งาน

คําถามที่ 3. ความเข้มข้นของบัฟเฟอร์ที่วิ่งสําหรับ 50X คือเท่าไหร่?

สารเข้มข้นจะถูกเจือจางในอัตราส่วน 1:50 กับน้ํากลั่นเพื่อให้ได้สารละลายที่ทํางานได้ 1X โดยปกติแล้ว ควรใช้ชุดเดียวกันของ 1X ในการทําเจลและเติมน้ําในห้องทํางาน

คําถามที่ 4 จําเป็นต้องใช้บัฟเฟอร์วิ่งด้วยความเร็วสูงก่อนสกัดเจลหรือไม่?

ตามข้อมูลของ Longlight Super Fast Running Buffer สามารถใช้สําหรับการสกัดและเชื่อมต่อเจลดีเอ็นเอ ทําให้สามารถนําตัวอย่างไปใช้ในงานมาตรฐานถัดไปได้

คําถามที่ 5 สามารถนําบัฟเฟอร์อิเล็กโทรโฟรีซิสแบบรวดเร็วกลับมาใช้ใหม่ได้หรือไม่?

ผลิตภัณฑ์นี้มีความสามารถในการบัฟเฟอร์สําหรับการนํากลับมาใช้ใหม่ แต่แนะนําให้เปลี่ยนผลิตภัณฑ์เป็นระยะ ๆ เพื่อให้มั่นใจในความแม่นยําและความสามารถในการทําซ้ํา ควรตรวจสอบอุณหภูมิและสภาพการทํางานซ้ํา ๆ ด้วย