การสลายเซลล์ที่เชื่อถือได้เริ่มต้นด้วยการควบคุมอุณหภูมิ: ตัวก่อกวนเซลล์อัลตราโซนิกที่โฟกัสสําหรับตัวอย่างที่ละเอียดอ่อน

ทําไมอัลตราโซนิกความร้อนเอียงผลลัพธ์

เมื่ออัลตราซาวนด์ไม่โฟกัสความร้อนจะกลายเป็นสารทําปฏิกิริยาร่วมที่ไม่ต้องการ โพรงอากาศทําให้เกิดจุดร้อนระดับไมโครที่เพิ่มอุณหภูมิอย่างรวดเร็วทําให้โปรตีนเปลี่ยนสภาพเร่งนิวคลีเอสและโปรตีเอสและการกระจายตัวของดีเอ็นเอที่มีอคติ สิ่งนี้นําไปสู่ประสิทธิภาพของเอนไซม์ที่ดริฟท์การกระจายขนาดชิ้นส่วนที่เปลี่ยนไปและความแปรปรวนของผลผลิตแบบแบทช์ต่อแบทช์ เทคโนโลยี Focused Ultrasonic Cell Disruptor จํากัดการเกิดโพรงอากาศและ จํากัด ความเครียดจากความร้อนเพื่อให้ผลลัพธ์สม่ําเสมอ แม้ว่าอุณหภูมิเฉลี่ยของอ่างจะดูยอมรับได้ แต่การไล่ระดับความร้อนภายในหลอดตัวอย่างอาจมีขนาดใหญ่พอที่จะบิดเบือนผลลัพธ์ได้

แม้ว่าอ่างอาบน้ําโดยรอบจะดูเย็น แต่อุณหภูมิที่พุ่งสูงขึ้นชั่วคราวภายในท่อสามารถ:

•เปลี่ยนโปรตีนที่ไวต่อความร้อน

•กระตุ้นโปรตีเอสและนิวคลีเอส

•อคติ DNA หรือความสมบูรณ์ของโครมาติน

•ลดความสามารถในการทําซ้ําระหว่างการวิ่ง

สิ่งประดิษฐ์ทางความร้อนเหล่านี้แพร่กระจายไปตามปลายน้ํา ในการจัดลําดับรุ่นต่อไป (NGS) อคติการกระจายตัวเล็กน้อยอาจนําไปสู่อคติของเนื้อหา GC ที่เพิ่มขึ้น อัตราการทําซ้ําที่สูงขึ้น และความซับซ้อนของไลบรารีที่มีประสิทธิภาพลดลง ในโปรตีโอมิกส์ ความเครียดจากความร้อนอาจสนับสนุนโปรตีนที่อุดมสมบูรณ์และทนความร้อนได้ในขณะที่ลดความอุดมสมบูรณ์ของเป้าหมายที่มีความอุดมสมบูรณ์ต่ําหรือไวต่อความร้อน อย่างไรก็ตาม ในเวิร์กโฟลว์ FFPE อุณหภูมิที่สูงเกินไปอาจทําให้ความแปรปรวนของการกลับตัวของครอสลิงค์รุนแรงขึ้น และทําให้ระดับการกระจายตัวเกินช่วงที่เหมาะสมที่สุด อุตสาหกรรมได้ชดเชยมานานแล้วด้วยการแช่น้ําแข็ง การเต้นเป็นจังหวะเป็นระยะ และจังหวะลองผิดลองถูก ซึ่งเป็นมาตรการที่ลดปริมาณงาน แต่ไม่รับประกันการควบคุมไอโซเทอร์มอลที่แกนตัวอย่าง

(การเอาชนะประวัติการอ่อนตัวของความร้อนในหินแกรนิต:

การประยุกต์ใช้เสริมฤทธิ์กันของความล้าอัลตราโซนิกและความร้อนตกค้าง - ScienceDirect)

คืออะไร a เครื่องก่อกวนเซลล์อัลตราโซนิกที่มุ่งเน้น

Focused Ultrasonic Cell Disruptor จะรวมพลังงานเสียงความถี่สูงความยาวคลื่นสั้นลงในโซนอะคูสติกที่โฟกัสซึ่งตรงกับตําแหน่งตัวอย่างแทนที่จะให้พลังงานแก่ถังทั้งหมดหรือปลายโพรบโลหะตามอําเภอใจ การส่งพลังงานแบบไม่สัมผัส: คลื่นอะคูสติกจับคู่ผ่านตัวกลางที่ควบคุมเข้าไปในภาชนะตัวอย่างที่ปิดสนิท สถาปัตยกรรมนี้หลีกเลี่ยงการสัมผัสโพรบโดยตรงและลดความเสี่ยงในการเกิดละอองลอยและการปนเปื้อนข้ามในขณะที่ควบคุมวิธีการและสถานที่เกิดโพรงอากาศได้อย่างแม่นยํา

ที่ Longlight Technology เราได้ออกแบบเส้นทางอะคูสติก ส่วนต่อประสานกับภาชนะตัวอย่าง และลูปควบคุมข้อเสนอแนะเป็นระบบเดียวแบบบูรณาการ โมดูลตรวจจับและควบคุมอุณหภูมิที่มีความไวสูงจะตรวจสอบโซนตัวอย่างจริงอย่างต่อเนื่อง ไม่ใช่แค่อ่าง และปรับพลังงานแบบเรียลไทม์เพื่อรักษาสภาวะอุณหภูมิต่ําและอุณหภูมิคงที่อย่างแท้จริง เนื่องจากรูปทรงโฟกัสมีความเสถียร การเปิดรับแสงอะคูสติกจึงสามารถทําซ้ําได้สูงระหว่างการวิ่งและเครื่องดนตรีต่างๆ ผลลัพธ์ที่ได้คือการหยุดชะงักที่สม่ําเสมอ การตัด DNA หรือโครมาตินที่คาดเดาได้ และการทําให้เป็นเนื้อเดียวกันอย่างสม่ําเสมอในสภาพแวดล้อมที่ไม่สัมผัสกันซึ่งรักษาความสมบูรณ์ของโมเลกุล

• พลังงานที่มุ่งเน้นอย่างไร and ทรูต่ํา-งานควบคุมอุณหภูมิ?

•การโฟกัสแบบคอนโฟกัส: อัลตราซาวนด์ความยาวคลื่นสั้นจะโฟกัสอย่างแม่นยําด้วยเสียง โดยเน้นพลังงานในตัวอย่างในขณะที่ลดการสูญเสียนอกเป้าหมาย

•สภาพแวดล้อมไอโซเทอร์มอล: กระบวนการทํางานภายในตัวกลางของน้ําที่ควบคุม การสกัดความร้อนทําได้ทันที เพื่อป้องกันความร้อนที่กระชากที่ด้านหน้าโพรงอากาศ

•การจัดการท่อปิด: ตัวอย่างยังคงปิดผนึก ไม่มีการใส่โพรบหมายถึงความเสี่ยงในการปนเปื้อนที่ลดลงและไม่มีเศษโลหะขนาดเล็ก

•ข้อเสนอแนะแบบเรียลไทม์: ข้อเสนอแนะของอุณหภูมิและพลังงานทําให้สภาวะของกระบวนการมีเสถียรภาพเปลี่ยนกระบวนการแบบอะนาล็อกในอดีตให้เป็นกระบวนการดิจิทัลที่ตรวจสอบย้อนกลับได้

หลักฐานจาก tเขาฟิลด์ and นานาชาติศึกษา

อัลตราโซนิกที่มุ่งเน้นถูกนํามาใช้กันอย่างแพร่หลายในชีววิทยาโมเลกุลและเวิร์กโฟลว์การเตรียมตัวอย่างที่ความเสถียรของอุณหภูมิและความสามารถในการทําซ้ําเป็นสิ่งสําคัญรวมถึงการตัดดีเอ็นเอการเตรียมโครมาตินและการสลายเซลล์อย่างอ่อนโยนสําหรับโปรตีโอมิกส์

• Meyer และ Kircher (Nature Protocols, 2010) อธิบายการสร้างห้องสมุด Illumina ที่ใช้อัลตราโซนิกที่มุ่งเน้นเพื่อการตัด DNA ที่แม่นยํา

(Meyer และ Kircher (Nature Protocols, 2010))

•Landt et al. (การวิจัยจีโนม, 2012) ผ่านคําแนะนํา ENCODE / modENCODE ChIP-seq เน้นการควบคุม sonication (รวมถึงรูปแบบที่มุ่งเน้น) เพื่อให้ได้การกระจายตัวของโครมาตินที่ทําซ้ําได้กดเพื่อป้อนพลังงานที่ได้มาตรฐานและการควบคุมอุณหภูมิอย่างระมัดระวังเพื่อป้องกันสัญญาณเฉพาะของแอนติบอดี

(Landt et al. (การวิจัยจีโนม, 2012))

•Van Dijk, Jaszczyszyn และ Thermes (Trends in Genetics, 2014) ทบทวนการสร้างห้องสมุด NGS และสังเกตว่าอัลตราโซนิกที่มุ่งเน้นเป็นวิธีการกระจายตัวทางกายภาพทําให้เกิดการกระจายขนาดที่แคบลงและลดอคติของลําดับเมื่อเทียบกับวิธีการที่ไม่สามารถควบคุมได้โดยเฉพาะอย่างยิ่งสําหรับอินพุตที่อุดมไปด้วย GC หรือเสื่อมสภาพ

(Van Dijk, Jaszczyszyn และ Thermes (Trends in Genetics, 2014))

ในการประมวลผลจีโนมิกส์ โปรตีโอมิกส์ และ FFPE ข้อความมีความสอดคล้องกัน: ลดการสัมผัสความร้อนให้เหลือน้อยที่สุดและเก็บพลังงานอะคูสติกไว้ที่โซนโฟกัสเพื่อปรับปรุงความสามารถในการทําซ้ํา ผลลัพธ์เหล่านี้ตรวจสอบหลักการหลักของ Focused Ultrasonic Cell Disruptor: วินัยทางความร้อนเป็นตัวกําหนดความสมบูรณ์ของข้อมูล

• เอ็นจีเอส and เกณฑ์มาตรฐานการตัดโครมาติน

•การกระจายส่วนที่แน่นหนาช่วยลดการสูญเสียการเลือกขนาดและเพิ่มผลผลิตของไลบรารี

•การเบี่ยงเบนความร้อนที่ต่ํากว่าช่วยรักษาสมดุล GC และลดอัตราการทําซ้ํา

•ชิ้นส่วนโครมาตินที่ทําซ้ําได้ช่วยเพิ่มการโทรสูงสุดและการเปรียบเทียบข้ามไซต์

ภายในเทคโนโลยี Longlight's โซลูชั่น

Longlight Technology สร้าง เดสก์ท็อป หลาย-ช่อง Focused Ultrasonic Cell Disruptor เพื่อให้อะคูสติกแบบไม่สัมผัสแบบไอโซเทอร์มสามารถเข้าถึงได้ทุกม้านั่งในห้องปฏิบัติการโดยไม่ต้องใช้กล่องหุ้มเสียงภายนอกหรือคอมพิวเตอร์ภายนอก แพลตฟอร์มรองรับตําแหน่งตัวอย่างแปดตําแหน่งและอนุญาตให้ประมวลผลโหมดฟรีได้ตั้งแต่ 1 ถึง 8 ตัวอย่าง ทําให้สามารถกําหนดเงื่อนไขที่เป็นอิสระสําหรับแต่ละหลอดเมื่อกลุ่มประชากรตามรุ่นของคุณแตกต่างกัน และโหมดแบทช์เพียงคลิกเดียวเมื่อการวิ่งของคุณสม่ําเสมอ

•ปริมาณงานที่ยืดหยุ่น: ประมวลผลตัวอย่าง 1 - 8 ตัวอย่างด้วยการเปิดรับแสงอะคูสติกที่ปรับแต่งได้อย่างอิสระสําหรับกลุ่มประชากรตามรุ่นที่ซับซ้อน หรือป้อนพารามิเตอร์หนึ่งครั้งสําหรับชุดตัวอย่างที่คล้ายคลึงกันเพื่อขับเคลื่อนประสิทธิภาพ

•เงียบโดยการออกแบบ: เส้นทางอะคูสติกทางวิศวกรรมและการหน่วงภายในให้การทํางานที่เงียบโดยไม่ต้องใช้ฝาครอบเสียงเสริมทําให้ง่ายต่อการปรับใช้ในห้องปฏิบัติการส่วนกลาง

•การประมวลผลแบบไม่สัมผัส: พลังงานถูกมุ่งเน้นผ่านตัวกลางการมีเพศสัมพันธ์ในภาชนะที่ปิดสนิท - ไม่มีการสัมผัสโพรบ - ลดความเสี่ยงในการปนเปื้อนและรักษาวัสดุที่ละเอียดอ่อน

•การควบคุมอุณหภูมิต่ําและอุณหภูมิคงที่อย่างแท้จริง: การตรวจจับความละเอียดสูงพร้อมการควบคุมวงปิดรักษาค่าที่ตั้งไว้ในโซนตัวอย่างทําให้ความร้อนในกระบวนการเป็นกลางและปกป้องสารวิเคราะห์ที่ไม่สามารถใช้ความร้อนได้

•บันทึกที่ตรวจสอบย้อนกลับได้: ข้อมูลเมตาของเซสชันจะถูกบันทึกและเข้าถึงได้ตลอดเวลาเพื่อเปิดใช้งานความสามารถในการตรวจสอบการปฏิบัติตาม SOP และการเพิ่มประสิทธิภาพที่ขับเคลื่อนด้วยข้อมูล

•การระบายน้ําอัตโนมัติ: การปล่อยของเสียด้วยการแตะเพียงครั้งเดียวพร้อมการตรวจจับระดับอัจฉริยะและการแจ้งเตือนล่วงหน้าช่วยป้องกันน้ําล้นและทําให้พื้นผิวการทํางานสะอาด

•ระบบปฏิบัติการในตัว: ทํางานโดยไม่ต้องใช้คอมพิวเตอร์ภายนอกลดขนาดระบบและทําให้การตรวจสอบความถูกต้องง่ายขึ้น

•ระบบปฏิบัติการในตัว: ไม่จําเป็นต้องใช้พีซีภายนอก ช่วยลดรอยเท้าและปรับปรุงการตรวจสอบความถูกต้องด้านไอที

ที่แกนอะคูสติกรูปทรงเรขาคณิตที่เน้นคอนโฟกัสของเราจะรวมพลังไว้ภายในเรือ จํากัด การสูญเสียพลังงานและเสริมสร้างความสามารถในการทําซ้ํา ด้วยการลบผู้ปฏิบัติงานออกจากการจับเวลาด้วยตนเองและการตัดสินใจ "รูปลักษณ์และความรู้สึก" แบบอัตนัย ระบบจะยกระดับมาตรฐานระหว่างผู้ปฏิบัติงาน กะ และไซต์งาน มีความแข็งแรงเป็นพิเศษในการตัด DNA สําหรับ NGS ซึ่งขนาดเม็ดมีดที่สม่ําเสมอจะแปลโดยตรงเป็นประสิทธิภาพการจัดลําดับและการควบคุมต้นทุน และในการตัดโครมาตินซึ่งสัญญาณเฉพาะของแอนติบอดีสามารถปกปิดได้โดยการกระจายตัวมากเกินไปหรือน้อยเกินไป

ทั่วไป aและความรู้ที่ถูกมองข้าม tหมวกแก้จุดปวด

•อุณหภูมิอยู่ในท้องถิ่น: อุณหภูมิอ่างไม่ใช่อุณหภูมิตัวอย่าง การควบคุมต้องอ้างอิงโซนตัวอย่างเพื่อป้องกันการไล่ระดับความร้อนที่ซ่อนอยู่

•โพรงอากาศมีลายเซ็น: ระบบที่มุ่งเน้นสร้างพลวัตของฟองสบู่ที่สอดคล้องกัน ระบบโพรบที่ผิดปกติไม่ทํา ความสอดคล้องแปลเป็นการแจกแจงส่วนย่อยที่ทําซ้ําได้

•การปนเปื้อนเป็นแบบสะสม: การกําจัดการสัมผัสโพรบจะช่วยหลีกเลี่ยงการสะสมของสารตกค้างและอนุภาคโลหะอย่างค่อยเป็นค่อยไปซึ่งอาจทําให้การทดสอบที่ละเอียดอ่อนเช่น MALDI-TOF MS สับสน

•บันทึกมีความสําคัญ: โปรไฟล์การสัมผัสเสียงและอุณหภูมิที่ตรวจสอบย้อนกลับได้ช่วยเร่งการแก้ไขปัญหาและเปิดใช้งานเอกสารที่ป้องกันได้และพร้อมตามกฎระเบียบ

จากจุดปนเปื้อน to ผลตอบแทน: การใช้งาน and ผลลัพธ์

ห้องปฏิบัติการหลายแห่งทนต่อความแปรปรวนเนื่องจากเครื่องมือเดิมดูเหมือน "ดีพอ" ต้นทุนสะสม - การวิ่งที่ล้มเหลว การทําซ้ํา และข้อสรุปที่ไม่แน่นอน - มีมากกว่าการประหยัดที่รับรู้ Focused Ultrasonic Cell Disruptor จะปรับกรอบแคลคูลัสนี้โดยการผสมผสานความแม่นยําของเสียงเข้ากับวินัยทางความร้อนและความเรียบง่ายในการใช้งาน

จีโนมิกส์และ NGS: การตัดแบบควบคุมทําให้เกิดการกระจายชิ้นส่วนที่แคบโดยมีอคติน้อยที่สุดปรับปรุงความหนาแน่นของคลัสเตอร์ลดการก่อตัวของไดเมอร์อะแดปเตอร์และเพิ่มความหลากหลายของไลบรารีที่มีประสิทธิภาพ สําหรับจีโนมที่อุดมด้วย GC หรือ DNA ที่เสื่อมสภาพการควบคุมอุณหภูมิต่ําที่แท้จริงจะรักษาความสมบูรณ์ในระหว่างการกระจายตัว

โปรตีโอมิกส์และชีววิทยาของเซลล์: การหยุดชะงักแบบไม่สัมผัสช่วยรักษาโครงสร้างโปรตีนดั้งเดิมและการดัดแปลงหลังการแปลที่ไวต่อความร้อนชั่วคราว ผลลัพธ์ที่ได้คือปรับปรุงการตรวจจับโปรตีนที่มีความอุดมสมบูรณ์ต่ําและโปรไฟล์เชิงปริมาณที่ซื่อสัตย์มากขึ้น

โครมาตินและ Epigenomics: ความยาวของชิ้นส่วนโครมาตินที่ทําซ้ําได้ช่วยเสริมสร้างความละเอียดสูงสุดและลดความแปรปรวนระหว่างการทํางาน ความเสถียรของอุณหภูมิช่วยปกป้องโปรตีน - ดีเอ็นเอเชิงซ้อนในระหว่างการสลายป้องกันการเฉือนมากเกินไปและการสูญเสียเอพิโทป

การระบุ MALDI-TOF MS: สําหรับเชื้อราเส้นใยและ Mycobacterium พลังงานแบบไม่สัมผัสที่โฟกัสจะเร่งการหยุดชะงักของผนังเซลล์ในขณะที่ลดการปนเปื้อนจากโพรบ

FFPE Deparaffinization และการสกัด: อะคูสติกที่มุ่งเน้นช่วยกําจัดพาราฟินและการจัดการครอสลิงค์ภายใต้อุณหภูมิที่มีการควบคุมอย่างเข้มงวดเพิ่มการกู้คืนกรดนิวคลีอิกและโปรตีนโดยไม่กระจายตัวมากเกินไป

ความเป็นเลิศในการดําเนินงาน: ความจุแปดหลอดพร้อมการควบคุมต่อตัวอย่างหรือการดําเนินการเป็นชุดช่วยให้ทีมสามารถสลับไปมาระหว่างโปรโตคอลตามความต้องการและไปป์ไลน์ที่มีปริมาณงานสูง อะคูสติกที่เงียบสงบและระบบปฏิบัติการในตัวทําให้การวางตําแหน่งในพื้นที่แออัดง่ายขึ้น การระบายอัตโนมัติและบันทึกที่ค้นหาได้และตรวจสอบย้อนกลับได้จะตัดทอนการทํางานด้วยตนเองและสนับสนุนกรอบงานด้านคุณภาพ

ติดต่อ-tหรือ-การกระทํา

หากทีมของคุณกําลังปรับขนาด NGS, โปรตีโอมิกส์ หรือการเตรียมตัวอย่างทางคลินิก อย่าปล่อยให้ความร้อนด้วยอัลตราโซนิกกําหนดข้อมูลของคุณ ติดต่อ Longlight Technology เพื่อขอการสาธิตเครื่องก่อกวนเซลล์อัลตราโซนิกที่โฟกัสของเราตรวจสอบบันทึกการใช้งานสําหรับการทดสอบของคุณและประเมินการควบคุมอุณหภูมิต่ําที่แท้จริงในเวิร์กโฟลว์ของคุณเอง ผู้เชี่ยวชาญของเราจะแมปจุดบกพร่องในปัจจุบันของคุณกับวิธีการอะคูสติกที่ผ่านการตรวจสอบแล้ว ซึ่งช่วยให้คุณสามารถสร้างมาตรฐานผลลัพธ์และเร่งเวลาในการรับข้อมูลเชิงลึก