บัฟเฟอร์อิเล็กโทรโฟรีซิสความเร็วสูงพิเศษ: เจลดีเอ็นเอที่เร็วขึ้นโดยไม่สูญเสียความชัดเจน

แม้ว่าการอิเล็กโทรโฟรีซิสด้วยเจลอะกาโรสจะง่ายและเชื่อถือได้ แต่เวลาสําหรับอิเล็กโทรโฟรีซิสแบบดั้งเดิมบางครั้งก็เป็นข้อจํากัดในห้องปฏิบัติการชีววิทยาระดับโมเลกุลที่ยุ่งหากห้องปฏิบัติการทําปฏิกิริยา PCR การย่อยอาหารจํากัด หรือการโคลนตัวอย่างหลายครั้งต่อวัน การใช้เวลา 30 นาทีอาจกลายเป็นคอขวดสําคัญเมื่อมีการประมวลผลเจลหลายชนิดในแต่ละวัน

บัฟเฟอร์อิเล็กโทรโฟรีซิสแบบเร็วพิเศษถูกออกแบบให้มีความแข็งแรงของไอออนต่ํากว่า ซึ่งลดการนําไฟฟ้าและกระแสไฟฟ้าที่ความเข้มสนามไฟฟ้าที่กําหนด และจํากัดความร้อนจากจูลสิ่งนี้ช่วยให้สามารถใช้ความเข้มสนามไฟฟ้าสูงขึ้นภายใต้สภาวะที่ได้รับการยืนยัน ลดระยะเวลาการแยกตัวในขณะที่ยังคงความละเอียดของแถบความถี่ที่ใช้งานได้

รวดเร็วมาก อิเล็กโทรโฟรีซิส บัฟเฟอร์—มันคืออะไร?

บัฟเฟอร์อิเล็กโทรโฟรีซิสแบบอัลตร้าฟาสต์เป็นบัฟเฟอร์อิเล็กโทรโฟรีซิสที่มีความเข้มต่ํา ซึ่งได้รับการปรับแต่งเพื่อการแยกชิ้นส่วนดีเอ็นเออย่างรวดเร็วในเจลอากาโรสจัดหาไอออนที่จําเป็นสําหรับการนําไฟฟ้าและสภาวะทางเคมีระหว่างการเคลื่อนที่

ความแข็งแรงของบัฟเฟอร์นี้ต่ํากว่าบัฟเฟอร์แบบดั้งเดิมส่วนใหญ่ จึงเกิดความร้อนน้อยลงในสภาวะการทํางานที่กําหนดเนื่องจากกระแสไฟฟ้าสิ่งนี้ช่วยให้สามารถใช้ความชันแรงดันไฟฟ้าที่สูงขึ้นในห้องปฏิบัติการและลดระยะเวลาการทํางาน

Longlight's บัฟเฟอร์ทํางานเร็วสุด 50 เท่า เป็นสารละลายเข้มข้น และจะช่วยลดเวลาการแยกจากปกติ 30 นาทีเหลือประมาณ 5-10 นาที ขึ้นอยู่กับสภาพที่แนะนํา

เหตุผล ต่ํากว่า ความแข็งแรงของไอออนสามารถเพิ่มความเร็วในการวิ่งได้ไหม?

ดีเอ็นเอมีประจุลบและเคลื่อนที่ไปยังขั้วไฟฟ้าบวกในสนามไฟฟ้ายิ่งสนามไฟฟ้าสูงเท่าไหร่ ดีเอ็นเอก็จะเคลื่อนที่เร็วขึ้นเท่านั้น แต่บัฟเฟอร์แบบดั้งเดิมสามารถสร้างความร้อนได้มากที่สนามไฟฟ้าสูง

ความร้อนสูงเกินไปอาจทําให้อะกาโรสละลาย ส่งผลให้ช่องทางโค้งงอ แถบโค้ง หรืออุปกรณ์อิเล็กโทรโฟรีซิสเสียหายบัฟเฟอร์ที่มีความแรงไอออนิกต่ําจะทําให้กระแสไฟฟ้าลดลง;ความร้อนที่ผลิตน้อยลง ทําให้สามารถทํางานที่แรงดันไฟฟ้าสูงได้ง่ายขึ้น

ไม่ได้หมายความว่าแรงดันไฟฟ้าจะเพิ่มขึ้นได้ไม่จํากัดขนาดของเจล ความลึกของบัฟเฟอร์ การออกแบบห้อง และอุณหภูมิแวดล้อมกับความจุแหล่งจ่ายไฟ ยังคงมีผลต่อการวิ่ง

จะเร็วขึ้น อิเล็กโทรโฟรีซิส ผลลัพธ์คือความละเอียดลดลง?

เมื่อบัฟเฟอร์ ความเข้มข้นของอะกาโรส แรงดันไฟฟ้า และระยะทางของการวิ่งเหมาะสมกับตัวอย่าง การแยกที่ดีสามารถทําได้ด้วยการวิ่งเร็วเงื่อนไขเหล่านี้มักไม่ได้รับการตรวจสอบเมื่อถ่ายโอนวิธีการ ซึ่งส่งผลให้ความละเอียดต่ํา

เพื่อให้เศษชิ้นส่วนแยกตัวได้ ต้องมีระยะเคลื่อนที่เพียงพอหากมีขนาดใกล้เคียงกันหากหยุดการไหลเร็วเกินไป เศษชิ้นส่วนอาจถูกบีบอัด แม้ว่าจะเห็นว่าสีติดตามเคลื่อนที่ไปแล้ว ใกล้บ่อ

สิ่งสําคัญคือห้องปฏิบัติการต้องแยกแยะความแตกต่างระหว่างการวิเคราะห์เพื่อระบุการมีอยู่หรือไม่มี กับเจลวิเคราะห์ความละเอียดสูงวิธีแรกอาจต้องใช้เวลาในเจลสั้นกว่า และวิธีที่สองอาจต้องใช้เวลานานกว่าหรือแรงดันไฟฟ้าต่ํากว่าเล็กน้อย

วิธีเตรียมบัฟเฟอร์ทํางาน 1X จากสารเข้มข้น 50X?

ควรเจือจางสารเข้มข้น 50 เท่าให้เป็นสารละลาย 1 เท่าตัวอย่างเช่น เพื่อทําบัฟเฟอร์ทํางาน 1 ลิตร ให้ผสมสารเข้มข้น 50 มล. 20 มล. กับน้ํากลั่นหรือน้ําล้างแร่ 980 มล.

เขย่าให้ทั่วก่อนหล่อหรือเติมน้ําในห้องสําหรับทั้งการเตรียมเจลอากาโรสและถังสําหรับทํางาน ให้ใช้การเตรียม 1X เดียวกันเพื่อรักษาความสม่ําเสมอในการนําไฟฟ้าของระบบ

อย่าเจือจางบัฟเฟอร์ต่ํากว่าค่าความเข้มข้นที่แนะนําเพื่อช่วยลดกระแสไฟฟ้าอีกบัฟเฟอร์ที่อ่อนแอและ/หรือรูปแบบแถบความถี่ที่ไม่สม่ําเสมออาจเกิดจากความเข้มข้นที่ไม่ถูกต้อง ซึ่งอาจนําไปสู่การเคลื่อนที่ผิดปกติ

อะไรคือ ถูกต้อง แรงดันไฟฟ้าที่จะตั้ง?

แรงดันไฟฟ้าควรกําหนดโดยความยาวเจลที่มีประสิทธิภาพ ไม่ใช่แค่เลือกจากการตั้งค่าที่คุ้นเคยบนแหล่งจ่ายไฟ Longlight แนะนําให้ใช้ความยาวเจลประมาณ 25–30 V/cm กับบัฟเฟอร์ที่ทํางานเร็ว

แต่การตั้งค่าสุดท้ายควรคํานึงถึงห้องอิเล็กโทรโฟรีซิสและประเภทของเจลและอุณหภูมิบัฟเฟอร์ด้วยแรงดันไฟฟ้าสุดท้ายควรคํานึงถึงความยาวเจล โหลดตัวอย่าง การออกแบบห้อง และอุณหภูมิบัฟเฟอร์ด้วย

แหล่งจ่ายไฟต้องมีความเสถียรในเอาต์พุตที่การตั้งค่าที่ต้องการ The แหล่งจ่ายไฟอิเล็กโทรโฟรีซิส EP-600 ผลิตโดย Longlight ถูกออกแบบมาเพื่อให้แหล่งจ่ายไฟอิเล็กโทรโฟรีซิสที่เสถียรสําหรับห้องปฏิบัติการ

เจลอะไร เงื่อนไข ยังไม่เปลี่ยนแปลง?

บัฟเฟอร์ไม่สามารถทดแทนการใช้ความเข้มข้นของอะกาโรสที่ไม่เหมาะสมได้ความเข้มข้นของอะกาโรสที่ต่ําจะสนับสนุนชิ้นส่วนที่มีน้ําหนักโมเลกุลสูงกว่า และยิ่งความเข้มข้นของอากาโรสสูงจะยิ่งแยกชิ้นส่วนดีเอ็นเอขนาดเล็กได้ดีขึ้น

ความหนาของเจลก็สําคัญเช่นกันเจลที่หนาอาจใช้เวลานานกว่าในการย้อมและมีความร้อนมากกว่าทําความสะอาดการก่อตัวของบ่อและโหลดตัวอย่างโดยไม่ทําลายขอบ

ห้องแนวนอนที่เข้ากันได้ช่วยให้ปรับสมดุลสภาวะไฟฟ้าได้ The HE-50 ระบบเจลแนวนอน รองรับระบบเจลหลายแบบและมีดีไซน์ห้องที่ใช้บัฟเฟอร์ต่ํา

ควรใช้วิธีการย้อมสีและการแสดงผลแบบใดสําหรับดีเอ็นเอ?

ขึ้นอยู่กับผลิตภัณฑ์และขั้นตอนการย้อม สามารถใช้การย้อมด้วยกรดนิวคลีอิกในระหว่างการเตรียมเจล หรืออาจใช้หลังจากการอิเล็กโทรโฟรีซิสเมื่อเปรียบเทียบบัฟเฟอร์เร็วกับวิธีการย้อมสีที่มีอยู่ วิธีการย้อมต้องเหมือนกัน

การวิ่งสั้นมากอาจส่งผลต่อการรับรู้ความเข้มของการย้อม โดยเฉพาะถ้าแถบสีวิ่งระยะสั้นจึงควรปรับการเปิดรับแสง ดังนั้นจากข้อข้างต้น ไม่ควรลอกเลียนแบบการรับแสงอัตโนมัติจากการวิ่งปกติ

LongLight's RedView คราบกรดนิวคลีอิก สามารถใช้แสดงผล DNA และ RNA ในเจลอะกาโรสและโพลีอะคริลาไมด์ และทํางานร่วมกับอุปกรณ์ถ่ายภาพทั่วไป

ใช่หรือเปล่า เป็นไปได้ เพื่อเก็บดีเอ็นเอหลังจากวิ่งอย่างรวดเร็ว?

ใช่ ตราบใดที่บัฟเฟอร์และสีย้อมไม่มีผลต่อการสกัดเจลและปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นในภายหลังตามข้อมูลของ Longlight 50X Super Fast Running Buffer ไม่มีผลต่อการสกัดหรือการเชื่อมเจล DNA

ลดการสัมผัสกับแสง UV ที่ไม่จําเป็นและตัดเจลสไลซ์ให้เล็กที่สุดเท่าที่จะทําได้เพื่อการฟื้นฟูที่ดีที่สุดแถบควรแยกออกจากกันเพื่อให้แยกไม่ให้มีผลิตภัณฑ์ข้างเคียงอยู่ด้วย

เมื่อการตรวจสอบวิธีการใช้สําหรับการโคลนนิ่งหรือการถอดรหัสลําดับ หรือกระบวนการปลายน้ําที่ละเอียดอ่อนอื่น ๆ ให้ประเมินผลผลิต ความบริสุทธิ์ และประสิทธิภาพของดีเอ็นเอที่กู้คืนได้

ควรเปลี่ยนบัฟเฟอร์ขณะรันเมื่อไหร่?

บัฟเฟอร์บางชนิดสามารถนํากลับมาใช้ใหม่ได้ แต่ควรควบคุมการนํากลับมาใช้ใหม่ ไม่ใช่แค่รูปลักษณ์เท่านั้นเมื่อใช้งานซ้ํา อุณหภูมิ การกระจายไอออน และประสิทธิภาพของบัฟเฟอร์อาจเปลี่ยนแปลงได้

หากการเคลื่อนที่ช้าลง แถบสัญญาณไม่เป็นไปตามที่คาดหวัง หรือสารละลายปนเปื้อน ให้เปลี่ยนบัฟเฟอร์อีกเหตุผลหนึ่งที่ควรตรวจสอบบัฟเฟอร์คืออุณหภูมิห้องสูง และหลังจากรันต่อเนื่องกันที่เร็วขึ้น

หากตัวอย่างมีความสําคัญหรือมีอินพุตต่ํา แนะนําให้ใช้บัฟเฟอร์ทํางานใหม่เพื่อหลีกเลี่ยงความแปรปรวนที่ไม่จําเป็น

ขั้นตอนที่เหมาะสมสําหรับห้องปฏิบัติการในการตรวจสอบความถูกต้องของสวิตช์คืออะไร?

ใช้บันไดดีเอ็นเอที่รู้จักและตัวอย่างใช้ความเข้มข้นของเจล ปริมาตรตัวอย่าง และวิธีการย้อมสีเดียวกันกับบัฟเฟอร์ที่มีอยู่และบัฟเฟอร์อัลตร้าฟาสต์ แล้วรันพร้อมกัน

จับคู่เวลาทํางาน รูปร่างแถบ การแยกชิ้นส่วนที่ใกล้ชิด และความสม่ําเสมอของการเคลื่อนที่และคุณภาพของภาพเมื่อมีการสกัดเจลในกระบวนการทํางาน ให้ประเมินผลผลิตของการสกัดเจลและปฏิกิริยาถัดไปด้วย

เมื่อได้รับการยอมรับแล้ว จะบันทึกการเจือจาง ความต่างของแรงดันไฟฟ้า ขนาดของเจล ความยาวของการไหล วิธีการย้อมเจล และจํานวนครั้งที่ใช้บัฟเฟอร์ Longlight สารรีเอเจนต์ทั่วไปและวัสดุสิ้นเปลือง ออกแบบมาเพื่ออํานวยความสะดวกในการประยุกต์ใช้จีโนมิกส์และชีววิทยาโมเลกุลในชีวิตประจําวัน

บทสรุป

บัฟเฟอร์อิเล็กโทรโฟรีซิสที่รวดเร็วพิเศษสามารถเปลี่ยนการวิเคราะห์เจลอากาโรสให้เป็นการตรวจสอบคุณภาพได้อย่างรวดเร็วข้อดีคือช่วยให้มีความแข็งแรงของไอออนต่ําลง แต่ยังคงมีความแข็งแรงของสนามไฟฟ้าที่ใช้งานได้สูง

อย่างไรก็ตาม ทุกแง่มุมของการเตรียม 1X การจับคู่เจลและบัฟเฟอร์การวิ่ง ความเข้มข้นของอะกาโรส และการควบคุมอุณหภูมิยังคงมีความสําคัญเพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่เชื่อถือได้การตรวจสอบแบบ side-by-side สั้น ๆ ช่วยให้ห้องปฏิบัติการสามารถลดเวลาการทํางานโดยไม่สูญเสียการแยกแถบความถี่ที่ตีความได้

คำถามที่ถามบ่อย

Q1. สามารถใช้บัฟเฟอร์อิเล็กโทรโฟรีซิสแบบอัลตร้าฟาสต์ร่วมกับเจลดีเอ็นเอได้หรือไม่?

ใช่ออกแบบมาเพื่อการแยกดีเอ็นเออย่างรวดเร็วในเจลอากาโรสแนะนําให้ผู้ใช้ตรวจสอบความเข้ากันได้ของห้องเจล การย้อมสี และกระบวนการทํางานในขั้นตอนถัดไป

Q2. 50X buffer พร้อมใช้งานหรือยัง?

ไม่สารเข้มข้น 50X ต้องเจือจางเหลือ 1X ก่อนเตรียมเจลหรืออิเล็กโทรโฟรีซิสการใช้สารเข้มข้นโดยตรงจะทําให้เกิดความแข็งแรงและการนําไฟฟ้าไอออนสูงเกินไป ส่งผลให้เกิดกระแสไฟฟ้าและความร้อนมากเกินไปในระหว่างการอิเล็กโทรโฟรีซิส

Q3. บัฟเฟอร์ชนิดเดียวกันนี้ใช้สําหรับการหล่อและสําหรับรันเจลไหม?

ใช่ แนะนําให้ใช้บัฟเฟอร์ทํางาน 1X ชุดเดียวกันสําหรับทั้งสองแบบสิ่งนี้ช่วยรักษาความแข็งแรงของบัฟเฟอร์ทั่วทั้งระบบเจล

Q4. เจลจะร้อนขึ้นไหมถ้าแรงดันไฟฟ้าสูงขึ้น?

หากไม่สามารถบัฟเฟอร์ได้อย่างเพียงพอ แรงดันไฟฟ้าหรือสภาพห้องอาจไม่เหมาะสมสําหรับการทํางานหลายครั้งและ/หรือห้องปฏิบัติการที่ร้อน ให้ตรวจสอบอุณหภูมิบัฟเฟอร์

Q5. เป็นไปได้ไหมที่จะกู้คืนดีเอ็นเอจากการแยกด้วยอิเล็กโทรโฟรีซอย่างรวดเร็วเพื่อการเชื่อมโยง?

ใช่ หากใช้สีและบัฟเฟอร์ที่เหมาะสมการตรวจสอบเบื้องต้นของห้องปฏิบัติการควรครอบคลุมถึงการฟื้นฟูและประสิทธิภาพการผูก