อธิบายการถ่ายภาพเจลความละเอียดสูง: การตัดเจลที่ปลอดภัยด้วยรังสียูวี

ปัจจุบัน High Resolution Gel Imaging เป็นรากฐานของความก้าวหน้าที่สําคัญมากมายในชีววิทยาโมเลกุล ทีมที่นําโดย Jennifer Doudna และ Emmanuelle Charpentier อาศัยอิเล็กโทรโฟรีซิสเจลที่แม่นยําและการถ่ายภาพความละเอียดสูงเพื่อตรวจสอบโครงสร้าง CRISPR งาน DNA โบราณที่บุกเบิกของ Svante Pääbo ต้องการการตรวจจับแถบที่ละเอียดอ่อนเพื่อแยกแยะชิ้นส่วนที่แท้จริงจากการปนเปื้อน โครงการจีโนมมนุษย์ซึ่งขับเคลื่อนโดยกลุ่มต่างๆ รวมถึงทีมของ Eric Lander ได้ปรับขนาดการวิเคราะห์เจลเพื่อทําแผนที่และตรวจสอบลําดับ หลักการหนึ่งยังคงคงที่: สายที่สะอาดและได้รับการแก้ไขอย่างดีและการจัดการที่นุ่มนวลเป็นสิ่งสําคัญ ปัจจุบัน การตัดเจลที่ปลอดภัยต่อรังสียูวีจับคู่กับ High Resolution Gel Imaging เพื่อปกป้องทั้งตัวอย่างและพนักงานในขณะที่รักษาประสิทธิภาพปลายน้ํา

(การทดลองของ Jennifer Doudna และ Emmanuelle Charpentier

เกี่ยวกับบทบาทของระบบ CRISPR/cas 9 ในภูมิคุ้มกันแบคทีเรียแบบปรับตัว (2012))

การถ่ายภาพเจลความละเอียดสูงคืออะไร

การถ่ายภาพเจลความละเอียดสูงอธิบายชุดความสามารถทางออปติคัล อิเล็กทรอนิกส์ และซอฟต์แวร์ที่จับแถบคมชัดและคอนทราสต์สูงจากกรดนิวคลีอิกหรือเจลโปรตีน มันรวมกล้องที่ละเอียดอ่อน เลนส์สัญญาณรบกวนต่ํา ฟิลเตอร์ที่ตรงกัน และไฟส่องสว่างที่ปรับเทียบด้วยการประมวลผลภาพอัจฉริยะ ผลลัพธ์ที่ได้คือการแยกแยะที่ชัดเจนระหว่างย่านความถี่ใกล้ ขนาดที่แม่นยํา และปริมาณที่ทําซ้ําได้ แม้ว่าสัญญาณจะอ่อนหรือพื้นหลังไม่สม่ําเสมอก็ตาม ในทางปฏิบัติ นั่นให้การโคลนที่เชื่อถือได้ การเตรียมไลบรารีที่สะอาดขึ้น การทําซ้ําน้อยลง และบันทึกที่เหมาะสําหรับการตรวจสอบที่มีการควบคุม

นอกเหนือจากความคมชัดของภาพแล้ว เวิร์กโฟลว์ยังถูกรวมเข้าด้วยกันตั้งแต่ต้นจนจบ การเข้าถึงตามบทบาท เส้นทางการตรวจสอบ และการตรวจจับเครื่องหมายอัตโนมัติช่วยลดความผิดพลาดของมนุษย์และสนับสนุนการตรวจสอบย้อนกลับ การรองรับแหล่งกําเนิดแสงและสีย้อมหลายแหล่งขยายการใช้งานจากเจล DNA และ RNA ไปจนถึง SDS-PAGE, เวิร์กโฟลว์โปรตีนที่ปราศจากคราบ, การถ่ายภาพอาณานิคม และการติดฉลากเรืองแสงหลายสี การถ่ายภาพเจลความละเอียดสูงได้พัฒนาจากกล้องบนกล่องไปสู่เครื่องมือที่เชื่อมต่อและสอดคล้องกับข้อกําหนดที่กึ่งกลางของม้านั่ง

(การจัดลําดับเบื้องต้นและการวิเคราะห์จีโนมมนุษย์ ธรรมชาติ)

ทําไมต้อง UV-เรื่องการตัดเจลที่ปลอดภัย

การส่องสว่างด้วยรังสียูวีแบบดั้งเดิมสามารถทําลายกรดนิวคลีอิกผ่านการก่อตัวของไทมีนไดเมอร์และการเกิดรอยขีดข่วน ผลที่ตามมาจะปรากฏขึ้นในภายหลัง: ประสิทธิภาพการโคลนที่ลดลง ผลตอบแทนไลบรารีที่ไม่สม่ําเสมอ และผลลัพธ์ Sanger หรือ NGS ที่คลุมเครือ การสัมผัสรังสียูวียังก่อให้เกิดความเสี่ยงด้านความปลอดภัยสําหรับผู้ใช้ ซึ่งทําให้การปฏิบัติตามข้อกําหนดและการฝึกอบรมซับซ้อนขึ้น

การตัดเจลด้วยแสงสีฟ้าให้เส้นทางที่ปลอดภัยยิ่งขึ้น ด้วยสีย้อมทั่วไปที่น่าตื่นเต้นโดยไม่มีความยาวคลื่นพลังงานสูงที่เป็นอันตรายต่อ DNA แสงสีน้ําเงินจะรักษาความสมบูรณ์ของชิ้นส่วนระหว่างการตัดแถบ เมื่อจับคู่กับพื้นผิวการตัดป้องกันที่ป้องกันรังสียูวี ผู้ปฏิบัติงานจะได้รับมุมมองที่ชัดเจน สําหรับห้องปฏิบัติการที่อยู่ภายใต้แรงกดดันในการปรับปรุงความสําเร็จในรอบแรก การตัดออกที่ปลอดภัยจากรังสียูวีเป็นคันโยกโดยตรงในการปรับปรุงผลลัพธ์

จุดบกพร่องทั่วไปที่วิธีนี้แก้ปัญหา:

• แถบเปื้อนหรือหายไปหลังจากการตัดเจลเนื่องจากการสัมผัสรังสียูวี

• ความสําเร็จในการโคลนนิ่งผันผวนแม้จากเลนเดียวกัน

•การเรียกใช้ซ้ําที่เกิดจากข้อผิดพลาดในการติดฉลากบันไดทําให้เสียเวลา

• ความกังวลด้านความปลอดภัยและความพร้อมใช้งานที่จํากัดของสถานี UV

• ช่องว่างในบันทึกทําให้การตรวจสอบและการสอบถามคุณภาพซับซ้อน

(หน่วยจีโนมวิวัฒนาการของมนุษย์ (Svante Pääbo) | กลุ่ม OIST)

ภายใน ลองไลท์ ระบบถ่ายภาพเจลความละเอียดสูง

แพลตฟอร์มในปัจจุบันนําเลนส์ การควบคุม การวิเคราะห์ และความปลอดภัยมารวมกันในหน่วยเดียว องค์ประกอบสําคัญ ได้แก่ :

• ทั้งหมด-ใน-การดําเนินการครั้งเดียว: ด้วยหน้าจอสัมผัสขนาด 12.1 นิ้วและการประมวลผลออนบอร์ดการได้มาปรับแต่งและการส่งออกเกิดขึ้นที่ม้านั่ง - ไม่จําเป็นต้องใช้คอมพิวเตอร์ภายนอกหรือสายเคเบิล

• การจับภาพที่ละเอียดอ่อน: CMOS ความไวสูง 6.3 MP พร้อมออปติกสัญญาณรบกวนต่ําเผยให้เห็นแถบที่อ่อนแอจากตัวอย่างที่มีจํานวนจํากัดบนพื้นหลังที่สม่ําเสมอ ความแตกต่างที่ละเอียดจะมองเห็นได้ง่ายกว่า สนับสนุนการเลือกและปริมาณที่ดีขึ้น

• การประมวลผลภาพอัจฉริยะ: การเปิดรับแสงอัตโนมัติ โฟกัสอัตโนมัติ และการปรับปรุงให้ผลลัพธ์ที่ทําซ้ําได้ คําอธิบายประกอบอัตโนมัติของเครื่องหมายจะตรวจจับขนาดแถบบันไดและใช้ป้ายกํากับ ลดการแก้ไขด้วยตนเอง และหลีกเลี่ยงข้อผิดพลาดในการถอดความ

• การส่องสว่างอเนกประสงค์: แหล่งกําเนิดรังสียูวี สีน้ําเงิน และสีขาวแบบส่งผ่านรองรับสีย้อมได้หลากหลายประเภท เครื่องมือหนึ่งรวมการถ่ายภาพเจลกรดนิวคลีอิก, SDS-PAGE, การตรวจจับโปรตีนที่ปราศจากคราบ, การถ่ายภาพอาณานิคม และเวิร์กโฟลว์เรืองแสงหลายสี

•ความสมบูรณ์ของข้อมูลและการปฏิบัติตามข้อกําหนด: การเข้าถึงตามบทบาทการดูบันทึกอย่างเป็นระเบียบและเส้นทางการตรวจสอบที่ครอบคลุมช่วยให้สามารถตรวจสอบย้อนกลับได้อย่างเต็มที่ทั่วทั้งเวิร์กโฟลว์ลดความเสี่ยงและทําให้การตรวจสอบง่ายขึ้นสําหรับกลุ่มที่ปฏิบัติตามข้อกําหนดหรือการทํางานร่วมกัน

•รองรับการตัดออกที่ปลอดภัยจากรังสียูวี: การตัดเจลภายนอกดําเนินการโดยใช้แผ่นตัดป้องกันรังสียูวีมาตรฐานที่ป้องกันรังสียูวีได้อย่างมีประสิทธิภาพปกป้องผู้ใช้และรองรับการแยกแถบที่แม่นยําภายใต้แสงสีน้ําเงิน

การถ่ายภาพเจลความละเอียดสูงไม่ได้เกี่ยวกับพิกเซลเท่านั้น มันเกี่ยวกับเวิร์กโฟลว์ที่ทําซ้ําได้และเป็นเอกสารที่เปลี่ยนเจลให้เป็นข้อมูลที่ป้องกันได้และตัวอย่าง DNA หรือโปรตีนที่พร้อมใช้งานและไม่บุบสลาย

จากการถ่ายภาพ tยูวี-การตัดเจลที่ปลอดภัย: a เวิร์กโฟลว์ที่ใช้งานได้จริง

ใช้ลําดับต่อไปนี้เพื่อปรับคุณภาพของภาพให้สอดคล้องกับความสมบูรณ์ของตัวอย่าง:

• เตรียมเจลและเลือกสีย้อมที่เข้ากันได้กับการกระตุ้นด้วยแสงสีน้ําเงินเพื่อรองรับการตัดที่ปลอดภัยจากรังสียูวี

• วางเจลบน stage และเลือกไฟส่องสว่างที่เหมาะสม เริ่มต้นด้วยแสงสีน้ําเงินเมื่อคาดว่าจะมีการตัดออก

• ใช้การเปิดรับแสงอัตโนมัติและโฟกัสอัตโนมัติเพื่อจับภาพที่คมชัดและมีความเปรียบต่างสูง ยืนยันว่ามองเห็นแถบจางๆ ได้โดยไม่ต้องเปิดรับแสงมากเกินไป

•เปิดใช้งานคําอธิบายประกอบอัตโนมัติของเครื่องหมายเพื่อติดฉลากขนาดแถบบันไดและล็อคพารามิเตอร์การปรับขนาดสําหรับการรายงานดาวน์สตรีม

• เปลี่ยนไปใช้พื้นผิวการตัดภายนอกโดยให้แผ่นป้องกันรังสียูวีเข้าที่ การส่องสว่างด้วยแสงสีฟ้าช่วยรักษากรดนิวคลีอิกในขณะที่ให้ทัศนวิสัยที่ชัดเจน

•สรรพสามิตวงดนตรีที่เลือกด้วยมีดผ่าตัดที่สะอาด ทํางานอย่างรวดเร็วและหลีกเลี่ยงการจุดเจลอีกครั้ง

•บันทึกการลบด้วยภาพถ่ายหลังการตัดอย่างรวดเร็วเพื่อความปลอดภัยในการตรวจสอบย้อนกลับ

•ส่งออกรูปภาพข้อมูลเมตาและเส้นทางการตรวจสอบที่ครอบคลุมไปยัง LIMS หรือที่เก็บข้อมูลที่ใช้ร่วมกันเพื่อสรุป

SOP ที่กระชับนี้ช่วยลดการทํางานซ้ํา ลดระยะเวลา และสร้างบันทึกที่สอดคล้องกับการตรวจสอบที่สอดคล้องกัน นอกจากนี้ยังรวมการเลือกแบนด์ระหว่างผู้ใช้ เพิ่มความสามารถในการทําซ้ําในโปรแกรมและกรอบเวลา

พันธมิตร fหรือความแม่นยํา aและความปลอดภัย

ทีมวิจัยในปัจจุบันแสวงหาผลลัพธ์สามประการจากการถ่ายภาพเจล: แถบที่คมชัดและตีความได้ ตัวอย่างที่ไม่บุบสลายหลังการตัด และบันทึกที่เชื่อถือได้และค้นหาได้ แพลตฟอร์ม Gel Imaging ความละเอียดสูงของเราจัดการกับผลลัพธ์แต่ละรายการในระบบเดียว ผสมผสานเอ็นจิ้นออปติคัลความละเอียดสูงเข้ากับซอฟต์แวร์อัจฉริยะ ไฟส่องสว่างแบบสามโหมด และรองรับการตัดเจลที่ปลอดภัยจากรังสียูวี ผสานรวมกับผลิตภัณฑ์และเวิร์กโฟลว์ในห้องปฏิบัติการกระแสหลักได้อย่างราบรื่น คุณจึงสามารถนําไปใช้กับการศึกษากรดนิวคลีอิกและโปรตีนได้โดยไม่หยุดชะงัก

หากห้องปฏิบัติการของคุณประสบกับคุณภาพของสายที่ไม่สอดคล้องกัน ให้ผลผลิตการโคลนต่ําหลังจากการสกัดเจล หรือช่องว่างในการตรวจสอบจากคําอธิบายประกอบด้วยตนเอง ให้พิจารณาเส้นทางที่ปลอดภัยและชาญฉลาดกว่า ค้นพบการถ่ายภาพเจลความละเอียดสูงและการตัดเจลที่ปลอดภัยต่อรังสียูวี: ปกป้องตัวอย่างและพนักงาน เปลี่ยนไปใช้การตัดด้วยแสงสีฟ้า และรับสายที่คมชัดด้วยเวิร์กโฟลว์ที่ปลอดภัยยิ่งขึ้น ติดต่อเราเพื่อขอการสาธิต รับชุดภาพตัวอย่างจากสีย้อมที่คุณเลือก หรือแมปเวิร์กโฟลว์กับ SOP ของคุณกับทีมแอปพลิเคชันของเรา ด้วยการรวมความคมชัดของภาพ การปกป้องตัวอย่าง และความสมบูรณ์ของข้อมูล คุณสามารถเปลี่ยนจากการแก้ไขปัญหาไปสู่ปริมาณงาน และรักษาวิทยาศาสตร์และบุคลากรของคุณให้ปลอดภัย