จะลดเวลาอิเล็กโทรโฟรีซิสของกรดนิวคลีอิกเหลือ 10 นาทีได้อย่างไร?

อิเล็กโทรโฟรีซิสของกรดนิวคลีอิกมักจะช้ากว่าที่ควรจะเป็น – ขโมยเวลา เจลร้อนเกินไป และทําให้การตัดสินใจล่าช้าในห้องปฏิบัติการที่วุ่นวาย

ความเจ็บปวด: ทําไมเจลถึงใช้เวลานานเกินไป

ทีมส่วนใหญ่ยอมรับการวิ่ง 30 – 60 นาทีเป็น "ปกติ" แต่ระยะยาวซ่อนต้นทุนที่แท้จริง ความร้อนสะสม แถบเบลอ และคุณเสียเวลาระหว่าง PCR และขั้นตอนต่อไป บัฟเฟอร์ TAE/TBE แบบคลาสสิกไม่ได้ออกแบบมาสําหรับความเร็วที่ความแรงของสนามที่สูงขึ้น กดแรงดันไฟฟ้าและเจลอุ่นขึ้น ผลักดันให้นานขึ้นและคุณเสี่ยงต่อการย้ายถิ่นที่บิดเบี้ยวหรือการฟื้นตัวที่ไม่ดี การใช้เจลซ้ําเพื่อแก้ไขค่าใช้จ่ายในการทานานกว่านาที ซึ่งจะลดความมั่นใจและอุดตันเวิร์กโฟลว์ของคุณ

จากการสนทนากับลูกค้า เราได้ยินจุดบกพร่องเดิมๆ ซ้ําแล้วซ้ําเล่า นักวิจัยต้องการการตรวจสอบผลิตภัณฑ์ PCR ได้เร็วขึ้น หน้าจอที่มีปริมาณงานสูงซึ่งไม่หยุดนิ่ง และแถบที่สะอาดซึ่งสามารถนําไปสู่การผูกมัดหรือการกู้คืนเจลได้โดยตรง การจัดซื้อจัดจ้างต้องการวัสดุสิ้นเปลืองที่มีอายุการใช้งานยาวนานและไม่ต้องเปลี่ยนอย่างต่อเนื่อง ที่ Longlight Technology เราถามคําถามง่ายๆ: จะเกิดอะไรขึ้นถ้า Nucleic Acid Electrophoresis สามารถเสร็จสิ้นได้อย่างน่าเชื่อถือภายใน 5 – 10 นาทีโดยไม่ลดทอนประสิทธิภาพปลายน้ํา

❓ ห้องปฏิบัติการบอกอะไรเราบ้าง?

ความร้อนสูงเกินไป ความแข็งแรงของบัฟเฟอร์ที่ไม่สอดคล้องกันระหว่างการหล่อและการวิ่ง และความวิตกกังวลเกี่ยวกับขั้นตอนปลายน้ําจํากัดความเร็ว ทีมลังเลที่จะเปลี่ยนบัฟเฟอร์เพราะพวกเขากังวลเกี่ยวกับการผูก ผลผลิตการสกัด หรือความเสถียรของ RNA คุณไม่ควรต้องเลือกระหว่างความเร็วและคุณภาพ

(ฟิกูเรื่อง 1. การใช้บัฟเฟอร์ Super Fast Running บนเจลอะกาโรส 0.8% เลน 1: D12000

บันได (5 ไมโครลิตร); เลน 2: 4 ไมโครลิตร; เลน 3: 3 ไมโครลิตร; เลน 4: 2 ไมโครลิตร; เลน 5: 1 μL)

(รูป 2. การประยุกต์ใช้บัฟเฟอร์ที่ทํางานเร็วเป็นพิเศษบน

เจลอะกาโรส 1% เลน 1: บันได D5000 (5 μL); เลน 2: 4 ไมโครลิตร; เลน 3: 3 ไมโครลิตร; เลน 4: 2 ไมโครลิตร; เลน 5: 1 μL)

(รูปที่ 3 การประยุกต์ใช้บัฟเฟอร์ที่ทํางานเร็วเป็นพิเศษบน

เจลอะกาโรส 2% เลน 1: บันได D1000 (5 μL); เลน 2: 4 ไมโครลิตร; เลน 3: 3 ไมโครลิตร; เลน 4: 2 ไมโครลิตร; เลน 5: 1 ไมโครลิตร)

• Super Fast Running Buffer เข้ากันได้อย่างสมบูรณ์กับเจลอะกาโรสที่มีความเข้มข้นต่างๆ (0.8%, 1%, 2%) ดังแสดงรูป 1–3. โดยไม่คํานึงถึงความเข้มข้นของเจล แถบกรดนิวคลีอิกจะรักษาความละเอียดและความคมชัดที่ดีเยี่ยม เพื่อให้มั่นใจถึงความต้องการในการทดลองในการแยกโมเลกุล DNA ที่มีขนาดต่างกัน

การแก้ไข: อธิบายบัฟเฟอร์ที่ทํางานเร็วเป็นพิเศษ

ของเรา 50x บัฟเฟอร์ที่ทํางานเร็วเป็นพิเศษ เป็นสูตรที่มีความเข้มข้นของไอออนต่ําที่สร้างขึ้นโดยเฉพาะสําหรับอิเล็กโทรโฟรีซิสกรดนิวคลีอิกอะกาโรส โหลดไอออนิกน้อยลงหมายถึงความร้อนน้อยลงในสนามที่กําหนด จับคู่กับความเข้มข้นของอะกาโรสที่เหมาะสม และคุณสามารถทํางานได้อย่างมั่นใจที่อุณหภูมิสูงสุด 25 – 30 V/ซม. บีบอัดการวิ่งที่มักใช้เวลา 30 นาทีให้เหลือเพียง 5 – 10 นาที ในการใช้งานแบบตัวต่อตัว โดยทั่วไปแล้วทีมจะเห็นการแยกที่เร็วกว่า ~2.5 – 3x TAE หรือ 1x TBE มาตรฐาน

วิธีการทํางาน

ความแรงของไอออนที่ต่ํากว่าช่วยลดความร้อนของจูลและช่วยรักษาแถบที่คมชัดที่แรงดันไฟฟ้าที่สูงขึ้น ความเสถียรทางความร้อนนั้นช่วยรักษาความละเอียดของ DNA และ RNA ในขณะที่เปิดใช้งานความเร็ว เคมีนั้นเป็นมิตรกับปลายน้ํา: ไม่รบกวนการสกัดหรือการผูกเจล DNA ดังนั้นคุณจึงสามารถย้ายไปยังการโคลนนิ่ง การล้างข้อมูล หรือควอนตัมได้โดยตรง

• การหมุนเร็ว: วิ่ง 5 – 10 นาทีที่ 25 – 30 V/cm

• Sharp Bands: ความละเอียดสูงแม้ภายใต้ความแรงของสนามสูง

• ความเข้ากันได้ปลายน้ํา: ไม่มีผลกระทบต่อการฟื้นตัวของเจลหรือการผูก

• การกู้คืนที่สูงขึ้น: มักจะเกินประสิทธิภาพการกู้คืน TAE/TBE

•ความจุบัฟเฟอร์ที่นํากลับมาใช้ใหม่ได้: บัฟเฟอร์ที่แข็งแกร่งสําหรับการใช้งานหลายอย่าง

• ติดตั้งด่วน

เจือจางบัฟเฟอร์ 1:50 เพื่อเตรียมสารละลายที่ใช้งานได้ 1x (เช่น 20x 20x 20 มล. ลงในน้ํากลั่น 980 มล.) เก็บ 1x ไว้ที่อุณหภูมิห้อง เพื่อความสม่ําเสมอที่ดีที่สุด ให้ใช้ชุดเดียวกัน 1x เพื่อหล่อและเรียกใช้เจล การผสมแบทช์ต่างๆ สามารถเปลี่ยนความแข็งแรงของบัฟเฟอร์ที่ส่วนต่อประสานเจลได้ อย่าเจือจางต่ํากว่า 1x ซึ่งทําให้เกิดการย้ายถิ่นที่ผิดปกติ

เงื่อนไขการใช้งาน

ใช้ความยาวเจล 25 – 30 V/cm และปรับตามรูปทรงเรขาคณิตของถังและพฤติกรรมการระบายความร้อนของคุณ เช่นเดียวกับการวิ่งในสนามสูง ให้ยืนยันขีดจํากัดของแหล่งจ่ายไฟของคุณ หากกระแสหรือปริมาตร tage ลอยลง ให้ตรวจสอบว่าเครื่องมือกําลังจํากัดกระแสไฟหรือกําลังไฟหรือไม่ การย้อมสีมีความยืดหยุ่น: เติมสีย้อมลงในเจลหรือคราบหลังการวิ่ง – ทั้งสองอย่างได้ผล

• ความปลอดภัยและความมั่นคง

การวิ่งต่อเนื่องหรืออุณหภูมิแวดล้อมสูงอาจทําให้อุณหภูมิบัฟเฟอร์สูงขึ้น หากจําเป็น ให้ทําให้เครื่องเย็นลงหรือวางบนน้ําแข็งเพื่อป้องกันความละเอียด เปลี่ยนบัฟเฟอร์เป็นระยะเพื่อรักษาความแม่นยํา จัดเก็บทั้งสต็อก 50x และโซลูชันการทํางาน 1x ที่อุณหภูมิห้อง ภายใต้เงื่อนไขที่แนะนํา ความเสถียรอย่างน้อย 12 เดือนนับจากวันที่ได้รับ เช่นเคย สวมเสื้อคลุมแล็บและถุงมือแบบใช้แล้วทิ้ง ผลิตภัณฑ์นี้มีไว้สําหรับใช้ในการวิจัยโดยผู้เชี่ยวชาญ

กําไรในโลกแห่งความเป็นจริงและวิธีเริ่มต้น

เมื่อความเร็วมีความน่าเชื่อถือทุกอย่างที่ปลายน้ําจะดีขึ้น เจล 5 – 10 นาทีช่วยให้คุณตรวจ PCR ปรับการเตรียมห้องสมุด หรือตรวจสอบการผูกมัดโดยไม่ทําให้วันตกราง สําหรับกลุ่มที่มีปริมาณงานสูง เจลที่เร็วขึ้นจะคลายการอุดตันของคิวและเพิ่มปริมาณงาน นั่นหมายถึงข้อมูลก่อนอาหารกลางวันมากขึ้น และฉายซ้ําในตอนเย็นน้อยลง

ที่ Longlight Technology เราสร้างบัฟเฟอร์นี้เพื่อช่วยให้ทีมลดวงจรระหว่างสมมติฐานและผลลัพธ์ ในการปรับใช้นําร่องห้องปฏิบัติการรายงานว่าแถบที่สะอาดขึ้นในสนามที่สูงขึ้นการส่งต่อไปยังการผูกที่ราบรื่นขึ้นและผลผลิตการสกัดเจลที่ดีขึ้นเมื่อเทียบกับบัฟเฟอร์แบบเดิม ความสามารถในการนํากลับมาใช้ใหม่และรูปแบบ 50x ที่เข้มข้นยังสนับสนุนการควบคุมต้นทุน: หนึ่งขวดไปได้ไกล และความจุบัฟเฟอร์ที่แข็งแกร่งหมายถึงการแลกเปลี่ยนน้อยลงระหว่างการวิ่ง

แนวทางปฏิบัติที่ดีที่สุดสําหรับอิเล็กโทรโฟรีซิสของกรดนิวคลีอิกอย่างรวดเร็ว

• ส่งและเรียกใช้ด้วยชุด 1x เดียวกันเพื่อความสม่ําเสมอ

• เริ่มต้นที่ 25 V/cm จากนั้นเลื่อนไปที่ 30 V/cm ตามที่การตั้งค่าของคุณอนุญาต

•ดูอุณหภูมิบัฟเฟอร์ในลําดับการวิ่งที่ยาวขึ้น เย็นตามต้องการ

• เก็บแรงดันไฟฟ้าต่ํากว่า 200 V หากคุณวางเจลหล่อ TAE/TBE ลงในบัฟเฟอร์ที่รวดเร็ว แรงดันไฟฟ้าที่สูงมากสามารถบิดเบือนผลลัพธ์ในสถานการณ์นั้นได้

• ที่มันส่องแสง

การตรวจสอบอย่างรวดเร็วระหว่างการโคลนการคัดกรองแอมพลิคอน PCR หลายสิบตัว และเร่งเวิร์กโฟลว์ RNA ที่โดยทั่วไปจะรวบรวมข้อมูลภายใต้ระบบแบบเดิม หากทีมของคุณใช้เวลารอเจลมากกว่าดําเนินการตามผลลัพธ์

ความคิดของ Fina

พร้อมที่จะลดเวลา Nucleic Acid Electrophoresis ของคุณลงเหลือ 10 นาที โดยไม่ต้องแลกเปลี่ยนความชัดเจนหรือการฟื้นตัวหรือไม่? พูดคุยกับ Longlight Technology วันนี้เพื่อขอตัวอย่าง รับเทมเพลต SOP หรือตรวจสอบความเข้ากันได้สําหรับกล่องเจลของคุณ มาเปลี่ยนเจลวิ่งจากคอขวดให้เป็นจุดตรวจอย่างรวดเร็วและทําให้การทดลองของคุณดําเนินต่อไป