บอกลาเจลช้าด้วยบัฟเฟอร์ที่ทํางานเร็ว

Fast Running Buffer เป็นบัฟเฟอร์อิเล็กโทรโฟรีซิสที่มีความแรงไอออนิกต่ําซึ่งออกแบบมาเพื่อเจลอะกาโรสที่รวดเร็วและเชื่อถือได้ มันลดการวิ่ง 30 นาทีทั่วไปลงเหลือเพียงไม่กี่นาทีในขณะที่ทําให้วงดนตรีคมชัดและตีความได้ง่าย ปัจจุบันมีการใช้กันอย่างแพร่หลายในการโคลนนิ่งปริมาณงานสูงเวิร์กโฟลว์การจัดลําดับรุ่นต่อไป CRISPR และโครงการแก้ไขยีนอื่น ๆ ตลอดจนการศึกษาการถอดรหัสและการควบคุมยีน ทีมวิจัยหลายคนพึ่งพามันเมื่อต้องการการตรวจสอบอย่างรวดเร็วระหว่างขั้นตอนการทดลองที่สําคัญโดยไม่เสียสละการกู้คืน DNA หรือประสิทธิภาพปลายน้ํา แต่เจลที่เร็วกว่าเป็นเพียงส่วนหนึ่งของเรื่องราวเท่านั้น บัฟเฟอร์นี้บรรลุความเร็วได้อย่างไรโดยไม่วุ่นวาย และมีความหมายอย่างไรต่อการทดลองประจําวันของคุณ นั่นคือสิ่งที่เราจะสํารวจต่อไป

(การแก้ไขยีน CRISPR/Cas9 | ห้องแล็บโครแกน)

ทําไมต้อง Slow Gels aรั้งห้องปฏิบัติการของคุณไว้

หากคุณใช้เจลทุกวัน คุณจะรู้ว่าสิ่งนี้เกิดขึ้นบ่อยแค่ไหน: คุณเตรียมอะกาโรส ใส่ตัวอย่าง เริ่มวิ่ง... แล้วจ้องมองไปที่ด้านหน้าสีย้อมที่ค่อยๆ เคลื่อนตัว การตรวจสอบ 30 นาทีที่ "รวดเร็ว" ฟังดูไม่เป็นอันตรายบนกระดาษ แต่ในตารางห้องปฏิบัติการจริงจะเพิ่มขึ้นอย่างรวดเร็ว

เจลช้าทุกเจลหมายถึง:

•ถังอิเล็กโทรโฟรีซิสถูกครอบครองนานกว่าที่ควรจะเป็น

•คุณรอเพื่อยืนยันขั้นตอน PCR สรุป หรือการโคลนนิ่งก่อนที่จะดําเนินการต่อ

•งานดาวน์สตรีม เช่น การผูก การแปลง หรือการจัดลําดับจะถูกผลักดันกลับ

กว่าหนึ่งสัปดาห์ของการโคลนนิ่ง การตัดต่อ CRISPR การถอดเสียง หรืองานคัดกรอง การวิ่งครึ่งชั่วโมงเหล่านั้นกินเวลาส่วนใหญ่ของคุณอย่างเงียบ ๆ ปริมาณงานลดลง ไทม์ไลน์ลื่นไถล และ "ฉันยังรอเจลอยู่" กลายเป็นข้อแก้ตัวที่คุ้นเคย

การผลักดันเจล TAE หรือ TBE มาตรฐานให้หนักขึ้นไม่ค่อยเป็นคําตอบ การเพิ่มแรงดันไฟฟ้ามักนํามาซึ่งปัญหา: ความร้อนสูงเกินไป แถบบิดเบี้ยว และการย้ายถิ่นที่ไม่สอดคล้องกัน หลังจากประสบการณ์ที่ไม่ดีสองสามทีมส่วนใหญ่กลับไปสู่เงื่อนไขอนุรักษ์นิยม – ยอมรับเจลช้าเป็นคอขวดที่ "จําเป็น"

Fast Running Buffer ได้รับการออกแบบมาสําหรับจุดบกพร่องนี้ เป็นบัฟเฟอร์ที่มีความแรงไอออนิกต่ําที่ช่วยให้คุณลดขนาดการแยก ~30 นาทีทั่วไปลงเหลือประมาณ 5 – 10 นาทีในขณะที่ยังคงรักษาแถบที่คมชัดและการกู้คืน DNA ที่เชื่อถือได้ แทนที่จะวางแผนวันของคุณเกี่ยวกับการวิ่งแบบเจล คุณสามารถถือว่าเป็นจุดตรวจด่วนที่ทําให้โครงการของคุณดําเนินต่อไป

สิ่งที่ทําให้ บัฟเฟอร์ที่ทํางานเร็ว แตกต่าง

หัวใจหลักของ Fast Running Buffer นั้นเกี่ยวกับความเร็วที่ปราศจากความวุ่นวาย มีให้เป็นสารเข้มข้น 50 เท่าดังนั้นคุณเพียงแค่เจือจางเป็นสารละลายที่ใช้งานได้ 1X ด้วยน้ํากลั่น บัฟเฟอร์ 1X เดี่ยวนั้นสามารถใช้ได้ทั้งสําหรับการหล่อเจลและสําหรับการวิ่งอิเล็กโทรโฟรีซิส โดยรักษาสภาวะให้สอดคล้องกันตั้งแต่ต้นจนจบ

เมื่อเทียบกับระบบ 1X TAE หรือ TBE ทั่วไป บัฟเฟอร์มีข้อดีหลายประการในทางปฏิบัติ:

✅เวลาทํางานสั้นลงอย่างมาก – การแยกโดยทั่วไปจะเสร็จสิ้นในเวลาประมาณ 5 – 10 นาทีแทนที่จะเป็น ~30 นาที

✅วิ่งเร็วขึ้น 2.5 – 3× – ด้วยความแรงของไอออนิกต่ํา คุณจึงสามารถวิ่งได้ที่ประมาณ 25 – 30 V/cm โดยไม่ต้องให้ความร้อนมากเกินไป

✅ความสามารถในการบัฟเฟอร์ที่แข็งแกร่ง – โซลูชัน 1X มักจะสามารถนํากลับมาใช้ใหม่ในเวิร์กโฟลว์ประจํา ซึ่งช่วยลดของเสียและต้นทุน

เนื่องจากบัฟเฟอร์มีความแรงของไอออนิกน้อยกว่า จึงสร้างความร้อนน้อยลงแม้ในแรงดันไฟฟ้าที่สูงขึ้น นั่นหมายความว่าคุณสามารถเพิ่มความแรงของสนามได้อย่างปลอดภัยและยังคงรักษาแถบตรงไว้เหมือนเดิมแทนที่จะเป็น "รอยยิ้ม" หรือรอยเปื้อนที่พร่ามัว ผลลัพธ์ที่ได้คืออิเล็กโทรโฟรีซิสที่รวดเร็วซึ่งยังคงดูเหมือนเจลที่คุณไว้วางใจในการตัดสินใจ

สิ่งสําคัญไม่แพ้กัน Fast Running Buffer เล่นได้ดีกับแอปพลิเคชันดาวน์สตรีม Fast Running Buffer เข้ากันได้อย่างสมบูรณ์กับชุดสกัดเจล DNA และชุดผูก คุณสามารถแบ่งแถบที่คุณต้องการ ทําให้บริสุทธิ์ตามปกติ และไปยังการโคลนหรือขั้นตอนปลายน้ําอื่นๆ ได้ทันที ไม่มีเวิร์กโฟลว์ใหม่ ไม่มีการตรวจสอบเพิ่มเติม

• เวิร์กโฟลว์ที่เรียบง่าย การเปลี่ยนแปลงน้อยที่สุด

คุณไม่จําเป็นต้องเขียน SOP ใหม่เพื่อใช้บัฟเฟอร์นี้ การจัดการในชีวิตประจําวันนั้นตรงไปตรงมา:

✅เตรียมสารละลายการทํางาน 1X โดยเจือจางสารเข้มข้น 50X ด้วยน้ํากลั่น เก็บไว้ที่อุณหภูมิห้อง มันคงที่เป็นเวลาหลายเดือน

✅ใช้ชุด 1X เดียวกันเพื่อทําเจลอะกาโรสและเป็นบัฟเฟอร์วิ่งในถัง สิ่งนี้ทําให้ความแรงของไอออนิกสม่ําเสมอทั่วทั้งระบบและช่วยหลีกเลี่ยงรูปแบบการย้ายถิ่นที่แปลกประหลาด

✅อย่าเจือจางต่ํากว่า 1X การเจือจางมากเกินไปอาจทําให้เกิดการโยกย้ายและการเลื่อนแถบที่ผิดปกติ

✅วิ่งที่ความยาวเจล 25 – 30 V/cm คุณสามารถปรับได้เล็กน้อยขึ้นอยู่กับการออกแบบถังและอุณหภูมิแวดล้อม แต่ช่วงนี้ให้ความสมดุลของความเร็วและความละเอียดที่เชื่อถือได้

การย้อมสียังคงตรงไปตรงมาเช่นกัน คุณสามารถย้อมสีเจลล่วงหน้าได้โดยการเติมสีย้อม DNA ลงในอะกาโรส หรือย้อมสีในภายหลังในอ่างแยกต่างหาก Fast Running Buffer รองรับทั้งสองวิธีและทํางานร่วมกับชุดย้อมสีตามปกติ ซึ่งหมายความว่าคุณไม่จําเป็นต้องใช้สีย้อมหรือฮาร์ดแวร์ภาพใหม่

ที่ไหน บัฟเฟอร์ที่ทํางานเร็ว ส่งมอบ tเขาคุ้มค่าที่สุด

Fast Running Buffer มีประโยชน์อย่างยิ่งในโครงการที่ต้องพึ่งพาการตอบสนองที่รวดเร็วและการตรวจสอบบ่อยครั้ง รวมถึง:

✅การศึกษาด้านการถอดรหัสและการควบคุมยีน

✅โครงการจัดลําดับจีโนมทั้งหมดและการจัดลําดับใหม่

✅เวิร์กโฟลว์การแก้ไขยีนและชีววิทยาสังเคราะห์

✅การตรวจสอบเป้าหมายยาและการทดสอบการคัดกรองสารประกอบ

✅การตรวจสอบการเจริญเติบโต การตาย และการตายของเซลล์

ในแต่ละพื้นที่เหล่านี้เจลทุกชิ้นทําหน้าที่เป็นประตูที่ควบคุมว่าเมื่อใดที่คุณสามารถไปยังขั้นตอนการทดลองต่อไปได้ มันบอกคุณว่า: "ตัวอย่างของฉันดีพอที่จะดําเนินการต่อหรือไม่"เมื่อแต่ละประตูใช้เวลาเพียง 5 – 10 นาทีแทนที่จะเป็นครึ่งชั่วโมง ไปป์ไลน์การทดลองทั้งหมดของคุณจะเร็วขึ้น

วิธีปฏิบัติในการแนะนํา Fast Running Buffer ในห้องปฏิบัติการของคุณคือการเริ่มต้นจากสิ่งเล็ก ๆ :

1. เริ่มต้นด้วยเจล QC ตามปกติ ใช้สําหรับการตรวจสอบ PCR, พลาสมิด minipreps หรือการย่อยเอนไซม์ ซึ่งคุณต้องยืนยันขนาดและความสมบูรณ์เท่านั้น

2. เรียกใช้การเปรียบเทียบแบบเคียงข้างกัน หล่อเจล TAE/TBE มาตรฐานและเจลบัฟเฟอร์ Fast Running ที่มีตัวอย่างเดียวกัน เปรียบเทียบเวลาทํางาน ความคมชัดของแบนด์ และรูปแบบการโยกย้าย

3. ติดตามการประหยัดเวลา สังเกตว่าคุณประหยัดเวลาได้มากแค่ไหนต่อการวิ่ง และคุณสามารถย้ายไปสู่การผูก การแปลง หรือการจัดลําดับได้เร็วแค่ไหนเมื่อเจลเสร็จสิ้น

คุณอาจเห็นว่าระบบอิเล็กโทรโฟรีซิสของคุณเปลี่ยนจาก "ขั้นตอนที่ทุกคนรอคอย" เป็นจุดตรวจสอบอย่างรวดเร็วที่ทําให้การทดลองดําเนินต่อไป

ในทางปฏิบัติห้องปฏิบัติการยังให้ความสําคัญกับความเสถียรของอุณหภูมิห้องและศักยภาพในการนําบัฟเฟอร์กลับมาใช้ใหม่ โซลูชัน 1X ชุดเดียวมักจะรองรับการทํางานเป็นประจําได้หลายครั้ง ตราบใดที่บัฟเฟอร์ยังคงชัดเจนและประสิทธิภาพยังคงสม่ําเสมอ สิ่งนี้ไม่เพียงแต่ช่วยปริมาณงาน แต่ยังช่วยลดจํานวนขวดหนักที่คุณต้องเตรียมและพกพาในแต่ละสัปดาห์

จากมุมมองด้านความปลอดภัยไม่จําเป็นต้องมีอะไรผิดปกติ PPE ห้องปฏิบัติการมาตรฐาน – เสื้อแล็บ ถุงมือแบบใช้แล้วทิ้ง แว่นตาป้องกัน – ก็เพียงพอแล้ว การจัดเก็บก็ง่ายเช่นกัน: ทั้งสารละลายเข้มข้น 50X และบัฟเฟอร์ 1X เจือจางสามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องภายในหน้าต่างความเสถียร ซึ่งช่วยเพิ่มพื้นที่ว่างในห้องเย็นที่มีผู้คนพลุกพล่าน

หากคุณเบื่อกับการวางแผนวันของคุณเกี่ยวกับเจลช้า Fast Running Buffer ขอเสนอทางเลือกที่สมจริง มันยังคงความรู้สึกที่คุ้นเคยของอิเล็กโตรโฟรีซิสอะกาโรสในขณะที่ลดเวลาการทํางานเป็นนาทีไม่ใช่ครึ่งชั่วโมง นั่นหมายถึงข้อมูลที่เร็วขึ้น วิ่งมากขึ้นต่อวัน และรอให้แบนด์ปรากฏขึ้นน้อยลง

โทรไปที่ Aคติ

หากเจลช้ายังคงเป็นคอขวดในเวิร์กโฟลว์ของคุณตอนนี้เป็นเวลาที่ดีในการทดสอบตัวเลือกที่เร็วกว่า ลองใช้ Fast Running Buffer ในการตรวจสอบ PCR หรือเจลโคลนชุดต่อไปของคุณ และดูว่าคุณสามารถให้เวลากับการวิเคราะห์ข้อมูลจริงและการออกแบบการทดลองได้นานแค่ไหน